隨著人民生活水平的提高，食品安全問題越來越受到重視。真菌毒素污染是造成大米等糧食安全的長(zhǎng)期隱患之一，已列入國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)體系。真菌毒素是由真菌產(chǎn)生的具有毒性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，其來源多樣、穩(wěn)定性強(qiáng)、健康危害嚴(yán)重。據(jù)報(bào)道，在全球范圍內(nèi)，每年約有 25%的農(nóng)產(chǎn)品受到不同程度的真菌毒素污染，特別是我國的主要糧食作物——大米、玉米、小麥。因此，預(yù)防和控制糧食真菌毒素污染是保障食品質(zhì)量安全的主要內(nèi)容，故針對(duì)谷物及其制品中真菌毒素多組分、高通量的快速檢測(cè)技術(shù)亟待開發(fā)。
本文依據(jù)糧油檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)《LS/T 6133-2018 糧油檢驗(yàn) 主要谷物中 16 種真菌毒素的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，建立了使用譜育科技自主研發(fā)生產(chǎn)的超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀 EXPEC 5210 測(cè)定大米中 33 種真菌毒素化合物含量的快速且高靈敏度的檢測(cè)方法，為大米中真菌毒素類化合物含量檢測(cè)提供參考。
樣品、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑和設(shè)備
儀器：EXPEC 5210 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀；
樣品：大米；
標(biāo)準(zhǔn)品：33 種真菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)品購于天津阿爾塔；
試劑：甲醇、甲酸、均為色譜純，水為超純水。
液相和質(zhì)譜條件
正離子：
負(fù)離子：
樣品前處理
（1） 取樣：精密稱取 0.5 g 供試品粉末（研磨過篩后），置 15 mL 離心管中；
（2） 溶劑重復(fù)提取：加入 2 mL 甲醇：水（3：2）振蕩 10 min 后，超聲 10 min，離心取上清液；殘?jiān)屑尤?2 mL 乙腈（含 1%甲酸）, 振蕩 10 min 后，離心取上清液；殘?jiān)性俅渭尤?1 mL 甲醇：水（3：2），振蕩 10 min 后，離心取上清液，最終合并三次提取的上清液；
（3） 上樣：上清液過 0.22 um 濾膜，上機(jī)檢測(cè)。
典型色譜圖
按照上述 2.2 條件上機(jī)測(cè)試，真菌毒素的典型色譜圖，如圖 1 和圖 2 所示。
圖 1 正離子模式下真菌毒素典型色譜圖（以 FB1 計(jì)，10ng/ml）
圖 2 負(fù)離子模式下真菌毒素典型色譜圖（以玉米赤霉烯酮計(jì)，2ng/ml）
線性和檢出限
標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液配制：以空白大米基質(zhì)配制系列梯度的真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，以目標(biāo)物的定量離子色譜峰面積為縱坐標(biāo)，目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,在對(duì)應(yīng)的線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù) r 值均在 0.995 以上。
表 1 正離子模式下部分真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線信息
表 3 負(fù)離子模式下部分真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線信息
重復(fù)性
從真菌毒素儲(chǔ)備液中吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，以空白大米基質(zhì)稀釋成標(biāo)準(zhǔn)曲線低（標(biāo)曲點(diǎn) 3）、中（標(biāo)曲點(diǎn) 6）、高（標(biāo)曲點(diǎn) 9）濃度的對(duì)照品，進(jìn)樣 6 次，考察保留時(shí)間和峰面積的重復(fù)性，結(jié)果圖 3 和 4 所示。由圖 3 和 4 可知，真菌毒素的保留時(shí)間 RSD 在 0.20%以下，峰面積 RSD 均在 5%以下，精密度較好。
回收率
從真菌毒素儲(chǔ)備液中吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，以空白大米基質(zhì)稀釋成低、中、高濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)品。經(jīng)過2.3 樣品前處理得到的回收率結(jié)果圖5 和6 所示。真菌毒素的回收率在80 -120%
之間。
樣品測(cè)試
按照 2.3 中樣品制備方法處理樣品，批處理結(jié)果如下圖所示，結(jié)果表明大米中有 3.6 μg/kg的伏馬毒素 B3 出。
結(jié)語
本實(shí)驗(yàn)考察了 33 種真菌毒素的線性、精密度、靈敏度、回收率等指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 33 種真菌毒素相關(guān)系數(shù) r 均大于 0.995，線性良好；定量限在 0.1-10 μg/kg 之間。在低、中和高的濃度下，連續(xù)進(jìn)樣六針 33 種真菌毒素的保留時(shí)間 RSD 在 0.20%以下，峰面積 RSD 均在 5%以下，精密度較好，并且在低、中和高的濃度下，33 種真菌毒素的回收率在 80-120%之間。由此可見，使用譜育科技高靈敏、高抗污染能力的 5210 系統(tǒng)可以對(duì)大米中的 33 種真菌毒素殘留量進(jìn)行快速、準(zhǔn)確、靈敏的定量檢測(cè)。
附錄
EXPEC 5210型 LC-MSMS 配置清單
